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    ELISA實驗指南(樣本制備和常見問題)

    ELISA可用于測定抗原,也可用于測定抗體。通??蛇m用于測定細胞培養上清、血清、血漿以及組織裂解物樣品等。


    ELISA樣本制備指南

    指南各種制備方法適用于常規ELISA,樣品的制備方法通常也會隨測定靶標和檢測方法而適當變化,在建立新的檢測方法時,建議查閱相關文獻或進行必要的流程優化。

    在收集樣品前有必要建立完整的計劃,必須清楚要檢測的成份是否足夠穩定,我們提倡新鮮樣品盡早檢測,對收集后當天就進行檢測的標本及時儲存在4℃備用。如有特殊原因需要周期性收集樣品,在造模取材后,將標本及時分裝后放在-20℃或-80℃條件下保存。因冰箱與室溫存在一定溫差,蛋白極易降解,直接影響實驗質量,所以避免反復凍融。


    液體類型樣品

    【細胞培養上清】

    將細胞培養基移至離心管,并在4℃條件下以1,500 rpm離心

    10min。立即等分上清液并于-80℃下保存樣品。盡可能減少樣品凍融。


    【血清】

    室溫血液自然凝固10~20min后,4℃條件下以3,000 rpm離心10min。立即等分上清液并于-80℃下保存樣品。保存過程中如有沉淀形成,應再次離心。避免反復凍融樣品。


    【血漿】

    將全血收集到含抗凝血劑的管中,根據標本的要求選擇EDTA、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,在4℃條件下以3,000 rpm離心10分鐘。立即等分上清液(血漿)并于-80℃下保存樣品,避免反復凍融樣品。


    【唾液】

    收集樣品并在4℃下以10,000 x g離心2分鐘。

    立即等分上清液并在-80℃下保存樣品,避免反復凍融樣品。


    【尿液】

    用無菌管收集,并在 4℃下以10,000 x g離心2分鐘。

    立即等分上清液并于-80℃下保存樣品。避免反復凍融樣品。


    組織樣品

    采集組織(最好在冰上操作,并應盡可能快以防止被蛋白酶降解

    )樣品后,稱取組織凈重,用液氮迅速冷凍保存備用。將樣品保存在- 80℃下以便后續使用或放置在冰上進行直接勻漿。加入一定量的組織提取緩沖液,用手工或勻漿器將樣品勻漿充分。


    在4℃下以13000 rpm離心20分鐘。置于冰上,將上清液(可溶的蛋白質提取物)等分至新的冷卻管中并在-80℃下保存樣品。避免反復凍融樣品。


    ELISA常見問題解答


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